Молекулалық биология ғылыми-зерттеу әдістері және оларды пайдалану

Молекулалық биология зерттеу әдістері қазіргі заманғы медицина, сот-ғылым, және биология маңызды рөл атқарады. ДНК және РНК зерттеу аванстар арқасында адам және т.б., қышқылдар қоспасында қажетті нуклеин қышқылы деп тану, қоздырғышын анықтау ағзаның геномының зерттеуге қабілетті

Молекулалық-биологиялық әдістер. Бұл не?

Артқа ғалымдардың 70-80s жылы қабылдамау бірінші болып адам геномын. Бұл іс-шара гендік инженерия және молекулалық биология дамуына серпін берді. ДНК қасиеттері мен РНҚ-ның зерттеу, ол ауру диагнозы, зерттеу генінің мақсатында осы нуклеин қышқылдары пайдалануға енді мүмкін екенін білдіреді.

ДНК және РНК дайындау

Молекулалық биология диагностикалық әдістері жиі осы: материал бастап талап нуклеин қышқылы. тірі ағзалардың жасушалары осы заттарды таңдау үшін бірнеше жолдары бар. Әрбір оның артықшылықтары мен кемшіліктері бар, және таза түрінде нуклеин қышқылдары оқшаулау әдісін таңдау кезінде ескеру керек.

Marmur арқылы ДНҚ 1. дайындау. әдісі таза ДНК нәтижесінде тұнба, алкоголь заттардың қоспасын емдеуде тұрады. Бұл әдістің кемшілігі болып коррозиялық заттар, фенол және хлороформ пайдалану болып табылады.

бум ДНК 2. оқшаулау. Мұнда пайдаланылатын негізгі зат - гуанидин thiocyanate (GuSCN) болып табылады. Ол тұндыру ықпал дезоксирибонуклеин қышқылы , ол кейіннен арнайы буфердің арқылы жинауға болады, оның мамандандырылған субстрат, бойынша. Алайда GuSCN - TCP туралы ингибиторы болып табылады, және бұл тіпті шағын бөлігі ДНК қалдырылады нуклеин қышқылдарымен бірге жұмыс істегенде маңызды полимеразды тізбекті реакция, барысын әсер етуі мүмкін.

қоспалардың 3. Жауын-шашын. әдісі молекулалар өздері dehoksiribonukleinovoy қышқылы және кірді сақтауға емес, бұл алдыңғы ерекшеленеді. Бұл әрекетті орындау үшін, ион алмастырғыштар пайдаланыңыз. кемшілігі емес, барлық заттар реттеуге болады.

4. Бұқаралық скрининг. Сіз ДНК молекуласының құрылымын, және кейбір статистиканы алу қажеттігі туралы нақты ақпарат болуы керек емес кезде, бұл әдіс жағдайларда пайдаланылады. себебі жуу құралдарын, атап айтқанда, сілтілер ұстағанда нуклеин қышқылы құрылымы зақымдалған болуы мүмкін, бұл.

зерттеу әдістерінің жіктелуі

Зерттеудің барлық молекулалық-биологиялық әдістер үш ірі топқа бөлінеді:

(Ферменттер көптеген пайдалана отырып) 1. күшейту. диагностикалық әдістерін көптеген маңызды рөл атқарады полимеразды тізбекті реакцияны, - Бұл ПТР кіреді.

2. Neamplifikatsionnye. әдістерін Бұл топ нуклеин қышқылы қоспалары жұмысымен тікелей байланысты. Мысалдары 3 түрлері кляксы болып, орындарға будандастыру және т.б.

нақты ДНҚ немесе РНҚ зонд байланыстырады зонд молекуласының, сигналдың тануға негізделген 3. әдістері. Мысал - гибридизация жүйесі Гибридті Capture System шешім (Hc2).

молекулалық биологиялық зерттеу әдістері қолданылуы мүмкін ферменттер

Көптеген молекулалық диагностикалық әдістер ферменттердің кең ауқымды пайдалануды қамтиды. Төменде жиі пайдаланылады:

1. шектеу фермент - қажетті бөліктеріне ДНК молекуласының «кесіп».

2. ДНҚ-полимераза - қос-тізбекті дезоксирибонуклеин қышқылы молекуласының синтезирует.

3. Кері транскриптаздың (кері транскриптаздың) - РНК үлгіден ДНК синтезі үшін пайдаланылады.

4. ДНК лигазы - нуклеотидтер арасындағы фосфодиэфирлі облигациялар қалыптастыру үшін жауапты болып табылады.

5. exonuclease - дезоксирибонуклеин қышқылы молекуласының соңы бөліктері нуклеотидтер жояды.

ПТР - ДНҚ күшейту негізгі әдісі

Полимеразды тізбекті реакция (ПТР) қазіргі заманғы молекулярлы биология кеңінен қолданылады. бір ДНҚ молекуласы көшірмелерін үлкен санын (күшейтетін молекуласы) алуға болады, онда бұл әдіс.

ПТР негізгі функциялары:

- аурулардың диагностикасы;

-, ДНК сегменттері клондау Gene.

бастапқы ДНҚ молекуласы, термоустойчивом ДНҚ-полимераза (Taq немесе PFU), deoxyribonucleotide фосфаттар (азот базаларының көздері), праймеры (2 Астар 1 ДНК молекуласы) және өзі жүргізе алады буферлік жүйесі: полимеразды тізбекті реакцияны жүзеге асыру үшін келесі элементтерді талап барлық реакциялар.

денатурация, праймер жасыту және ұзаруы: ПТР үш кезеңнен тұрады.

1. денатурация. 94-95 градус температурада Цельсий ДНҚ екі шынжырмен арасында сутектік бұғауларын үзіп proshodit, және нәтижесінде біз екі жалғыз-тізбекті молекулалар алуға.

2. праймерлер жасыту. 50-60 градус температурада Цельсий толықтыру түріне сәйкес бір-тізбекті нуклеин қышқылы молекулаларының ұштарында қосылу праймерлер жүреді.

3. ұзаруы. 72 градус температурада қызы екі тізбекті дезоксирибонуклеин қышқылы молекулалары синтезделеді отыр.

ДНК секвенирования

Молекулалық биология ғылыми-зерттеу әдістері жиі дезоксирибонуклеин қышқылының молекуласы нуклеотидтер бірізділігі білімін талап етеді. анықтау үшін генетикалық кодын дәйектілігі. Болашақта генодиагностикасы адам ретпен анықтау кезінде алынған білімді негізделетін болады.

Секвенирлеу келесі түрлері:

• Максам-Гилберт арқылы дәйектілігі;
• Sanger дәйектілігі;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe дәйектілігі.